Tips dhasar kanggo Crimreservation of Cell Budaya

Tips dhasar kanggo Crimreservation of Cell Budaya

Sel sel terus metabolisme sajrone kegiatan pertumbuhan normal, sing mbutuhake partisipasi macem-macem protein. Yen suhu mudhun ing ngisor -70 ° C, nggawe mandheg nyambut gawe. Mula, ing lingkungan sing suhu sithik, sel bisa mungkasi kegiatan metabolis lan ngetik negara sing gedhe banget sing ngidini panyimpenan jangka panjang.

1. Bahan eksperimen

Bahan dhasar:

Dasar Budaya Medium

Serum (fbs / nbs konvensional)

Workbench Ultrapure

Dimethylsl Sulfoxide (DMSO)

Sterile PBS Sterile Buffer Salt Salt

Bedhil pipetting

Bedhil pipa listrik

Preparation saka eksperimen kasebut

a) Persiapan saka solusi pembekuan:

Sel umum: 55% basal medium + 40% bovine serum (FBS / NBS) +% DMSO

Sel penting: 90% bovine serum (FBS / NBS) + 10% DMSO

Aliquot solusi Crimreservationvation menyang tabung centrifuge 15 mltek [sest] lan simpen ing 4 ° C kanggo nggunakake mengko.

(b) nyiapake sel sing kudu beku:

Sadurunge beku sel, pilih sel kanthi status wutah logarit lan ing fase wutah logaritma lan ngganti medium seger 12-24 jam sadurunge beku kanggo njaga kahanan sel.

2. Proses eksperimen

1. Mirsani kapadhetan sel dadi beku, sing udakara 80% ~ 90%. Gunakake bedhil pipet kanggo golek medium lawas, tambahake pbs steril kanggo ngumbah sel sel 1-2, lan copot sisa sisa ing lingkungan budaya.

2. Tambah jumlah trypsin utawa jus sing cocog kanggo ngidini trypsin mlebu sel kasebut, banjur lebokake inkubator kanggo pencernaan. Mirsani kahanan sel ing ngisor mikroskop: sitoplasma yaiku mundur lan sel ora ana maneh ing lembaran. Ing wektu iki, tambahake solusi Stop kanggo mungkasi proses pencernaan.

3. Alon-alon gelembung sel kanthi tip kanggo nggawe penundaan sel lan centrifuge penundaan sel ing 1000 rpm kanggo 3-5 menit.

Buwang supernatant, tambah jumlah larutan pembekuan sing cocog, lan pipette kanthi alon-alon supaya sel-sel sing larang. Nyetel Kapadhetan sel nganggo medium Crimreservation kanggo nggawe kapadhetan pungkasan 5 × 106 / ml ~ 1 × 107 / ml.

4. Gunakake bedhil pipet kanggo misahake tabung cryogenik miturut kapasitas samesthine, lan gunakake mesin capping otomatis kanggo tutup lan segel.

5. Program Crimreservation standar minangka tingkat pendinginan saka -1 ° C nganti -2 ° C / min, lan sel dadi beku bisa beku miturut langkah-langkah ing ngisor iki: Suhu 6 ° C (20min) → → - 20min) → → 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (sewengi) → Panyimpen jangka panjang ing nitrogen cair.

Uga bisa disimpen langsung ing mesin pembeku ing -80 ° C sewengi lan banjur ditransfer menyang nitrogen cair kanggo panyimpenan.

Yongyue Medical minangka perusahaan teknologi tinggi sing duwe spesialisasi ing R & D, produksi lan dodolan konsumables biomedis. Tips Pipette, pipette, pipette, piring PCR, produk budaya sel lan konsumen laboratorium biologis liyane. Yongyue medis pantes dipercaya lan pilihan! Sugeng rawuh ing konsultasi!